蛋白質(zhì)電泳和蛋白質(zhì)印跡

　　蛋白質(zhì)印跡是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的實驗方法。其基本原理是用特定抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣本染色。通過分析著色的位置和深度，可以獲得被分析細胞或組織中特定蛋白質(zhì)的表達信息。

　　SDS-PAGE凝膠試劑盒

　　貨號 (SKU) 包裝規(guī)格

　　S665689-200gels　　200-300gels

　　S665689-40gels　　40-60gels

　　基本描述

　　英文名稱：SDS-PAGE Gel Kit

　　儲存溫：度2-8°C儲存

　　運輸條件：冰袋運輸

　　產(chǎn)品內(nèi)容

　　組分40-60 gels200-300 gels

　　30%Acr-Bis(29:1)100ml2×250ml

　　SDS-PAGE Separating Gel Buffer (4×)100ml500ml

　　SDS-PAGE Stacking Gel Buffer (4×)50ml250ml

　　APS0.5g2.5g

　　TEMED1ml5ml

　　本產(chǎn)品所提供的APS(過硫酸銨)為固體粉末，使用前加入純水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5 ml純水、2.5 g APS加25 ml純水)，將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。

　　產(chǎn)品簡介

　　本產(chǎn)品包括SDS-PAGE凝膠制備所需全套試劑，只需自備純水，即可制備高質(zhì)量各 種濃度的變性PAGE凝膠，方便、快捷。本試劑盒在分離膠緩沖液和濃縮膠緩沖液中已 加入10%SDS，使用時不用另外加入。

　　SDS-PAGE凝膠試劑盒注意事項

　　1. 10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定，應(yīng)盡量減少室溫存放時間，每次取用后立即放回冰箱，以防失效;若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時間延長，應(yīng)考慮更換使用

　　-20度保存的10%APS。

　　2. PAGE凝膠的凝聚速度與溫度以及APS、TEMED的用量密切相關(guān);在其它條件不變的情況下，可通過改變APS及TEMED的用量，控制PAGE凝膠的聚合速度，凝膠聚合過快不利于操作;附表中的APS及TEMED量可供參考，應(yīng)根據(jù)實際操作情況做適當?shù)恼{(diào)整。

　　3. 在凝膠配制過程中，尤其是液體混勻步驟，應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。

　　4. 在分離膠上層加純水時要小心操作，加水時速度不能太快。

　　5. 丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。

　　6. 本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體實驗或人體治療。

　　操作步驟

　　根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度，最佳膠濃度請參考附表1。

　　I灌制分離膠(各試劑使用量請參考附表3)

　　1.參照凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。

　　注：加入上層篩板有助于加樣時保持填料與樣品均勻接觸，是否加入上層篩板可根據(jù)實際情況選擇。

　　2. 將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer和純水在小燒杯或試管中混合。

　　3. 加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

　　4. 在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端

　　1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可)， 然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1 cm的水層， 使凝膠表面保持平整。

　　5. 靜置30-60分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面后，表面凝膠已聚合。

　　II 灌制濃縮膠(各試劑使用量請參考附表2)

　　1. 去除覆蓋在分離膠上的水層。

　　2. 將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer和純水在一個小燒杯或試管中混合。

　　3. 加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

　　4. 將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。

　　5. 將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

　　6. 靜置10~20分鐘，等待濃縮膠聚合。

　　7. 待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。

　　8. 進行常規(guī)電泳操作。